近年來，市場上出現了許多自動細胞計數器。這種儀器使用了光學顯微鏡技術，但它帶來了更高的精度和可重復性，并將這種單調的工作自動化。小樣本量也是這種細胞計數器的另一個優點。許多儀器使用一次性載玻片，只需要10-20 uL樣品。將載玻片插入自動細胞計數器，相機會捕捉圖像。然后內置軟件分析圖像，顯示細胞數量等信息。
在這里，專家介紹了使用自動細胞計數器的三個技巧。
精確聚焦
與其他光學顯微鏡一樣，儀器的精確對焦對于計數非常重要。手動計數時，訓練有素的大腦可以輕松識別細胞。但是，自動細胞計數器中的攝像頭會檢測活細胞的亮中心和暗邊緣，并將其處理為黑白像素信息。如果細胞聚焦不準，亮中心會有明顯的灰度，會被誤認為死細胞。
大多數研究人員會發現，聚焦并不難，只要屏幕上顯示的圖像質量與傳統顯微鏡相似。確保你有一個清晰的形象是很重要的。還有一點就是要了解細胞計數器中攝像頭的分辨率。如果自動細胞計數器以低幀速率顯示，例如低于每秒15幀，顯示的圖像將不會實時響應聚焦旋鈕的微調。
控制幻燈片之間的差異
大多數基于圖像的自動細胞計數器使用具有清晰測量區域的一次性載玻片。該測量區域由物鏡的放大率和照相機的圖像傳感器的尺寸設定。這些細胞計數器通常測量0.4-0.5 uL的樣本，相當于4-5個大方塊的血細胞計數器。
與血細胞計數器不同，計數載玻片通常只使用一次。因此，載玻片之間的差異會顯著影響細胞計數的結果。對于某一組實驗，最好使用同一批載玻片，盡量避免這些差異。更改批號時，也建議使用標準微珠檢查載玻片。大多數細胞計數器制造商提供已知濃度的標準微珠。使用相同的微球樣品檢查不同的載玻片有助于發現差異。
評估軟件的集群性能
自動細胞計數儀的核心是進行分析的軟件，相當于人工計數時的人腦。大多數自動細胞計數器包含集成的軟件，可以精確地計數單細胞群體的數量。但是，當涉及到群集細胞的計數時，細胞計數器會有明顯的差異。由于培養細胞獲得的樣本并不總是單細胞群體，有時會有多個細胞團，自動細胞計數器的去團性能也需要仔細評估。當評估聚類性能時，可以執行圖1的檢測。
圖一。將HL-60細胞加熱至70 ℃,處理20分鐘，并殺死以獲得死細胞樣品。然后，使用兩種不同的自動細胞計數器來檢測樣品。細胞計數后，根據軟件捕捉的圖像進行比較。紅圈:死細胞；藍圈:活細胞；黑色圓圈:排除的對象。
自動細胞計數器正在取代繁瑣的人工計數方法。了解一些基本原理，全自動細胞計數器會幫你得到好的結果。